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聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配置过程？

编辑：qm球盟会网站发布时间：2018-01-27 10:54:50 来源：/ 点击：0

聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配置过程

    （1）制胶在两块制胶玻璃板中间放上垫片，放上制胶架，拧紧制胶螺丝夹紧玻璃板。制备适量合适浓度的凝胶，使之略多于胶板。

     不同浓度（%）聚丙烯酰胺凝胶的制法：

     在加入 TEMED 和 10%过硫酸铵后，立即混匀，倒入放置 45℃角的玻璃板内，完全注满（注意不要有气泡），迅速将玻璃板放置水平位置。立即放成型梳子于腔顶并夹紧，待 30-60 分钟胶聚合后，取下胶板，放入电泳槽中固定。

    （2）加样和电泳上下槽中加入 1×TBE 电泳缓冲液，溢过加样孔，拔出梳子，排出加样孔中的气泡，将 PCR 产物或限制性内切酶消化产物 2 与 1 上样缓冲液混匀，用微量注射器加入加样孔底部，使样品在孔底成一层，两侧孔中加入标准分子量的 DNA Marker。以 2-10V/cm 电压电泳，电泳时间足够长，使片断足以分开，待指示剂走到适宜位置时关闭电源，将胶片取出。

     （3）银染分开两块玻璃板，将凝胶片放入 100ml 银染固定液中振荡 15min，双蒸水洗 3 次，每次 2min，然后将凝胶片转入 100ml 0.2%的 AgNO3 中于摇床上染色约 10min，吸去 AgNO3 液，用双蒸水洗 3 次，每次 30s，加入 100ml 显色液约 7-10min，待 DNA 带显示清除时，吸去显色液，加入固定液 Na2CO3，静置 2-3min，取出凝胶观察。

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